甘蓝斑潜蝇检测

检测项目

1.虫体形态鉴定：成虫体长1.2-1.8mm，翅展1.8-2.5mm；中胸背板亮黑色；翅脉特征R4+5脉末端分叉角度35-45

2.幼虫头咽骨测量：上颚骨化区长度45-55μm；腹桥骨片宽度12-15μm

3.分子生物学检测：线粒体COI基因扩增（引物LCO1490/HCO2198），目标片段长度710bp

4.卵形态鉴别：卵长0.25-0.3mm，宽0.1-0.12mm；卵壳表面六边形网纹密度≥20个/100μm

5.蛹壳微结构观测：后气门突间距0.08-0.12mm；肛乳突数量6-8对

检测范围

1.新鲜甘蓝叶片样本（含潜道症状）

2.进出口植物种子（最大允许截获量≤3头/kg）

3.土壤样本（深度0-20cm）

4.农产品包装材料（木质/纸质）

5.其他十字花科寄主植物（花椰菜、西兰花等）

检测方法

ISO23537:2017《植物检疫措施——潜蝇科害虫鉴定规程》规定成虫玻片制作与测量规范

GB/T34748-2017《蔬菜害虫分子检测技术规范》明确COI基因扩增退火温度520.5℃

SN/T2036-2007《进境种苗潜蝇检疫鉴定方法》要求幼虫标本需经10%KOH透明处理

ASTME1752-17《显微成像系统校准标准》规范测量设备精度误差≤1μm

NY/T3088-2017《蔬菜害虫监测技术规程》规定黄板诱集器悬挂高度距地面50cm

检测设备

1.奥林巴斯BX53生物显微镜（配DP27成像系统）：400下测量虫体细微结构

2.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪：完成COI基因扩增与熔解曲线分析

3.LeicaEMCPD300临界点干燥仪：制备扫描电镜样本（蛹壳表面观测）

4.SartoriusCP225D电子天平（精度0.01mg）：称量样本前处理试剂

5.ZeissStemi508体视显微镜（8-50变倍）：初筛潜道危害症状

6.BioTekEpoch2酶标仪：进行DNA浓度测定（波长260/280nm）

7.MemmertIPP110培养箱：恒温251℃条件下饲养羽化成虫

8.ShimadzuGCMS-QP2020NX气质联用仪：分析虫体信息素成分（反式β-法尼烯）

9.EppendorfCentrifuge5430R高速离心机：12000rpm分离DNA提取液

10.KeyenceVHX-7000数码显微镜：三维重构幼虫口器结构