组织蛋白酶S检测

检测项目

1. 酶活性测定：反应体系pH 4.5-6.0（最佳pH 5.5），温度37±0.5℃，底物Z-FR-AMC浓度50-200μM

2. 蛋白浓度测定：BCA法标准曲线范围0.2-2.0mg/mL，Bradford法波长595nm

3. 抑制剂IC50值测定：梯度浓度0.1nM-100μM，孵育时间30-60min

4. 热稳定性测试：温度梯度25-60℃，时间梯度0-120min

5. 酶动力学参数：Km值测定范围10-500μM，kcat值精度±5%

检测范围

1. 临床样本：血清/血浆（采集后-80℃保存≤6个月）

2. 细胞裂解液：HepG2/THP-1细胞系（蛋白浓度≥1mg/mL）

3. 重组蛋白制剂：纯度≥90%（HPLC验证）

4. 抗体药物：ADC类药物结合效率检测

5. 体外诊断试剂：校准品线性范围0.1-50ng/mL

检测方法

1. ISO 15193:2009《体外诊断医疗器械生物源性样品中量的测量》

2. ASTM E2935-17《酶活性测定的标准实施规程》

3. GB/T 34800-2017《蛋白酶活性检测方法》

4. GB/T 33411-2016《生化试剂中蛋白酶K活性测定》

5. USP<1112>《生物技术衍生产品的表征》

检测设备

1. Agilent 1260 Infinity II HPLC系统：配备ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6×150mm,5μm）

2. Thermo Scientific Multiskan SkyHigh酶标仪：波长范围200-1000nm，温控精度±0.1℃

3. Malvern Zetasizer Pro纳米粒度仪：动态光散射测量范围0.3nm-10μm

4. Beckman Coulter AU5800生化分析仪：支持双波长（340/405nm）动力学法检测

5. Waters Xevo TQ-S质谱仪：MRM模式定量限0.01ng/mL

6. Eppendorf Mastercycler X50 PCR仪：温度均一性±0.3℃（96孔板）

7. PerkinElmer Lambda 365紫外分光光度计：带宽可调0.5-5nm

8. Mettler Toledo SevenExcellence pH计：分辨率0.001pH单位

9. Sartorius Cubis II分析天平：最小称量值0.01mg

10. BINDER CB系列恒温培养箱：温度波动±0.2℃（37℃工况）